En mis años mozos me hinché a hacer PCR's con bichito, era mi trabajo diario en el laboratorio. Cultivar, aislar, amplificar y secuenciar bichito para ver su evolución. Pues igual viene bien recordar como funciona la PCR.
La idea es una genialidad ese del tarado negacionista del HIV, pero es un idea de nobel como se llevó. Se dio cuenta de que determinadas bacterias funcionan bien a altas temperaturas, son las llamadas extremófilas y que por tanto contaban con proteinas para duplicar su ADN y tal que funcionan a altas temperaturas. En concreto una enzima que se llama la Taq Polimerasa (hace polímeros de ADN) procedente de la bacteria Thermus Aquaticus que vive en zonas de aguas termales y tal.
Pues la genialidad del loco fue decir... jorobar, si calentamos muestras de ADN lo suficiente estas se separan (por un tema de energías de los enlaces moleculares que unen sus pares de bases) y si ponemos un pequeño trocito (el
primer, dibujado en rojo) que es complementario a una secuencia de una de de las cadenas.... lo mezclamos con la polimerasa esta que funciona a altas temperaturas y con muchos nucleótidos sueltos (las letras del ADN) y entonces se hará la cadena complementaria. Es decir, se calienta, se baja un poco la temperatura para que se una el primer (o metes mucho primer para saturar), la Taq Polimerasa empieza a leer la otra cadena y va colocando nucleótidos uno detrás de otro haciendo una copia perfecta. Luego enfrías y se unen en una molécula de DNA de doble cadena.
Por cierto, los primers te los sintetizaban antes y te los mandan en un tubito. Diseñas tu secuencia, la longitud y te los mandan. Ahora igual se pueden sintetizar en el laboratorio y todo, ni idea. Los primers son lo que te da la especificad por cobi19, una bacteria, un gen humano o lo que sea. Para que solo se amplifíquenlo que quieres
jorobar, pero es que esto lo puedes hacer muchas veces! Y en cada ciclo duplicas las copias de la cadena de ADN. Es básicamente una fotocopiadora perfecta. Ideal para amplifcar genes, o para amplificar restos en cantidades traza.
Tiene un problema... que es que en cuanto tengas contaminación te lo amplifica, por ejemplo para tests de bichito. Cualquier cantidad ínfima te la va a amplificar.
Todo esto se hace en una máquina que se llama termocicladora, donde se meten los botes eppendorf de plástico con la mezcla de muestra, primers, nucleótidos y enzima Taq Polimerasa. Hay que hacer cálculos del número de ciclos de amplificación que quieres dar, de la temperatura a la que se unen los primers, la temperatura a la que se separan las cadenas (depende de la secuencia creo pero sobre todo de la longitud) y programas tanto la temperatura de enfriado, la temperatura máxima y hasta la velocidad de bajada de la temperatura entre pasos, todo ello para optimizar la separación, copia y unión de las cadenas.
Es una técnica genial que sin duda vale un nobel, de tan sencilla, reproducible y efectiva que es.
Pues eso... igual os sirve de algo esta parrafada. Ya podéis ir a dormir satisfechos rufianes. (Y que me corrijan los gazapos los científicos, que ya hace muchos años que colgué la bata).
